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谷氨酸棒杆菌合成酶基因克隆及L183Q定点突变方法
2013/04/10 C12N 15/70(2006.01)C12N 15/54(2006.0... 103233032A 2013年08月07日 吉林农业大学
本发明公开了一种高新生物技术,尤其涉及一种谷氨酸棒杆菌DAHP合成酶的基因克隆及L183Q定点突变方法。采用酶工程技术、分子生物学技术结合代谢工程理论和发酵工程技术等高新生物技术,利用底物结构类似物抗性突变株和苯丙氨酸、酪氨酸双营养缺陷型的谷氨酸棒杆菌为出发菌株,分别依据代谢工程理论,进行解除谷氨酸棒杆菌自身反馈调节、增强代谢流、增强色氨酸生物合成途径中关键酶的催化活性、增加底物生物合成量的研究,合理设计并改造谷氨酸棒杆菌的色氨酸生物代谢途径,得到产酸率和转化率符合合同要求的以玉米为原料生产饲料级L-色氨酸的基因工程菌。...
一种固定化脂肪酶及其制备方法和应用
2013/06/05 C12N 11/14(2006.01)C12P 7/62(2006.01... 103232992A 2013年08月07日 南京工业大学
本发明属于生物化工及酶工程领域,涉及一种固定化脂肪酶及其制备方法和应用。本发明将经过预处理的介孔TiO2采用硅烷偶联剂对其表面进行疏水改性,得到表面修饰的介孔TiO2载体;以修饰后的介孔TiO2为载体对脂肪酶进行固定化制备固定化脂肪酶;采用该固定化脂肪酶在有机相中进行芳香酯类的酶促合成和药物中间体的酶促手性拆分以及采用该载体对脂肪酶进行纯化研究。本发明所得到的载体可以从脂肪酶发酵粗酶液中选择性的吸附脂肪酶蛋白分子,因而固定化工艺简单,条件温和,固定化过程中酶活损失少,活性回收率高。所得的固定化脂肪酶在有机相中有着良好的立体选择性和催化活性,具有广阔的应用前景。...
一种利用重组Bacillussubtilis克隆表达粘质沙雷氏菌脂肪酶的方法
2013/05/24 C12N 15/75(2006.01)C12N 1/21(2006.01... 103243117A 2013年08月14日 江南大学
一种利用重组Bacillussubtilis克隆表达粘质沙雷氏菌脂肪酶的方法,属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得粘质沙雷氏菌中脂肪酶(lipA)的基因扩增,然后利用pMA-5质粒,首次实现了该基因在模式菌株枯草芽孢杆菌168中的过量表达。本发明首次构建产粘质沙雷氏菌脂肪酶的枯草芽孢杆菌工程菌株,对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现经过培养基成分及培养条件的优化之后脂肪酶活为98.6U/mL,是出发菌8.57U/mL的12倍,脂肪酶的活力较出发菌株有了显著提高。本发明为微生物发酵法生产脂肪酶的工业化提供了积极的指导作用并且可用于食品工业领域中。...
一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法
2013/05/29 C12N 9/20(2006.01)C12R 1/125(2006.01... 103243078A 2013年08月14日 南京工业大学
本发明属于酶工程技术领域,涉及一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法。本发明以枯草芽孢杆菌脂肪A为研究对象,首先筛选突变热点区域;再确定位于蛋白质表面且柔性较大区域的氨基酸位点;结合上述两步理性分析,筛选得到的氨基酸位点突变成天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸四种氨基酸残基的任意一种,并以该氨基酸为中心,在4Å范围内寻找上述4种氨基酸中带相反电荷的氨基酸残基,从而确定突变位点及突变残基;基于对酶结构与功能关系的认知,再解析离子键引入对稳定枯草芽孢杆菌脂肪脂肪酶A蛋白结构的作用机制;最终,通过枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株的热稳定性实验,验证热稳定性改造的热点残基。...
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